В литературе последних лет опубликованы ряд работ, в которых авторами предпринимаются попытки разработать высокоэффективный и универсальный метод специфической диагностики, который бы позволял оценить степень и валентность скрытой или клинически проявляющейся лекарственной сенсибилизации любого из возможных иммунологических механизмов. Среди предлагаемых новых методов можно отметить такие как определение динамики выделения сульфидолейкотриенов сенсибилизированными лейкоцитами [Kubota Y. et al., 1997], динамики снижения люминолзависимой хемилюминесценции [Дидковский Н.А. с соавт., 1996, Решетова Н.В. с соавт., 1997, Pytsky V.I. et al., 1997], динамики адренореактивности по Жихареву С.С. и Минееву В.Н., динамики стимулированного уровня диеновых коньюгатов — продуктов перекисного окисления липидов по Жихареву С.С. и Субботиной Т.Ф., определения показателя повреждения нейтрофилов по Фрадкину В.А. и изменения времени свертываемости крови по Канчурину А.Х. и Вайцескаускайте Р. [Бадина А.К., 1988, Дизик Г.М., 1988] после инкубации периферической крови пациента с лекарственной аллергией с физ.раствором и раствором лекарственного препарата. Все вышеперечисленные тесты объединяет методический подход, заключающийся в попытке выделить какой — либо компонент системы иммунитета, участвующий в аллергической реакции, в основном, на заключительных (патохимической и/или патофизиологической) стадиях ее развития, который может служить универсальным показателем степени ее выраженности [Дидковский Н.А. с соавт., 1996]. С таких позиций в качестве универсальных маркеров аллергической гиперчувствительности к лекарственным препаратам, не зависящих от иммунологического механизма развития, предлагаются уровень адренозависимого гликогенолиза и уровень диеновых коньюгатов [Бадина А.К.,1988], уровень генерации различных активных форм кислорода в нейтрофилах [Дидковский Н.А. с соавт., 1996, Pytsky V.I. et al., 1997], уровень сульфидолейкотриенов, выделяющихся сенсибилизированными лейкоцитами периферической крови после контакта с причинным аллергеном [Kubota Y. et al., 1997], свертывающая система крови [Бадина А.К., 1988, Дизик Г.М., 1988] и количество альтерированных лейкоцитов [Ногаллер А.Н., 1983, Eremina E.A. et al., 1997].
Однако, при использовании подобных универсальных методов в широкой лабораторной практике не исключается возможность регистрации случаев лекарственной непереносимости не только аллергического, но и псевдоаллергического характера [Решетова Н.В. с соавт., 1997, Pytsky V.I. et al., 1997], а то и последствий прямого токсического или иммуномодулирующего действия лекарственных препаратов определенных групп на иммунокомпетентные клетки (например, иммуносупрессивное действие антигистаминных препаратов [Казмирчук В.Е. с соавт., 1988], ингибирование активности внутриклеточной циклооксигеназы анальгетиками [Харкевич Д.А., 1993], гистаминлибераторное действие анестетиков [Леви Дж., 1990]) .
С появлением исследований о влиянии лекарственных препаратов на рецепторно — антигенный аппарат лимфоцитов стали появляться методы нового поколения, основанные на изучении состояния мембранных антигенов Т-лимфоцитов, определяющих развитие аллергической реакции на первой — иммунологической стадии после инкубации периферической крови пациентов in vitro с лекарственными препаратами с использованием таких современных биотехнологий, как гибридомная и проточная лазерная цитофлюриметрия [Leynadier F., et al., 1996, Макарков А.И. с соавт., 1997]. В основе нового методического подхода к решению проблемы создания современного эффективного метода специфической диагностики с высокими возможностями лежит положение, что компоненты системы иммунитета больного аллергическими заболеваниями претерпевают структурные и функциональные изменения относительно таковых здоровых людей, связанные, в первую очередь, с нарушением целостности и нормального функционирования мембраны и антигенно — рецепторного комплекса, расположенного в ее матриксе, в результате чего, вследствие нарушения процессов проведения антигенного сигнала происходит нарушение процессов нормальной антителопродукции и формирование атипической (в данном случае аллергической) реактивности системы иммунитета [Бережная Н.М. с соавт., 1983, Ялкут С.И., Котова С.А., 1987, Бережная Н.М., Котова С.А., 1990].
Особое внимание среди поверхностных антигенов Т-лимфоцитов в последнее время привлекает общелейкоцитарный антиген CD45, экспрессирующийся на всех ядросодержащих клетках крови и имеющий в своем составе гликопротеин тирозиновой фосфатазы. По экспериментальным данным последних лет, CD45 осуществляет антигенспецифическую активацию CD4+-, CD8+- и CD22+ -лимфоцитов, является центральным звеном в передаче раннего антигенного сигнала на TCR -комплекс и, следовательно, самым непосредственным образом влияет на регуляцию процессов антителопродукции [Albin J.G. et al., 1994]. Кроме того, в ряде работ было экспериментально доказано, что антиген CD45 способен образовывать связь с Fcε RI [Gorvaia N. et al., 1995], вследствие чего не исключено его участие в развитие IgE — опосредованных аллергических реакций.
Принимая во внимание тот факт, что уровень экспрессии антигена CD45 является отражением функционального статуса CD45+ — клеток иммунной системы, опосредующих развитие аллергических реакций в организме, нами был предложен метод определения степени изменения структурно-функционального состояния лимфоцитов после воздействия лекарственных препаратов на периферическую кровь пациентов с лекарственной аллергией in vitro, в основе которого лежит регистрация изменений экспрессии общелейкоцитарного антигена CD45 (ПЦМ — метод) [Vasneva J.P., et al.,1997, Васнева Ж.П. с соавт. 1997, 1998]. При изучении возможностей ПЦМ- метода определения лекарственной сенсибилизации немаловажное значение имеет решение методического вопроса о возможности с его помощью оценить характер воздействия лекарственных препаратов разной групповой принадлежности на клетки иммунной системы in vitro для исключения случаев регистрации прямого иммуномодулирующего или цитотоксического действия препаратов.
В связи с этим целью данной работы является разработка методического подхода к лабораторному обследованию пациентов с лекарственной аллергией, в который входит использование методов специфической диагностики и системы оценки полученных результатов на примере изучения характера воздействия препаратов группы антигистаминных и анальгетиков на показатели системы иммунитета in vitro, механизм действия которых, по литературным данным, не исключает прямой токсический или модулирующий эффект на клетки иммунной системы.
Для выполнения поставленных задач было обследовано 143 пациента (215 исследований) в возрасте от 15 до 50 лет с направительным диагнозом “лекарственная аллергия”, принимавших как антигистаминные препараты, так и анальгетики. Оценка степени ответной реакции системы иммунитета на воздействие лекарственных препаратов in vitro проводилась с использованием модифицированного метода Уанье [Г.Б.Федосеев с соавт., 1995], реакции специфического лейколизиса [А.М.Ногаллер, 1983] и разработанного нами ПЦМ — метода с использованием технологии лазерной проточной цитофлюориметрии (цитофлюориметра EPICS XL, Coulter USA) и меченных ФИТЦ моноклональных антител (МКАТ) ИКО — 46 (МедБиоСпектр, Москва) по отработанным ранее рабочим параметрам [Васнева Ж.П., Торопова Н.Е., 1995, Vasneva J.P., et al. 1997] (табл.1). Описание технических условий проведения экспериментальных исследований и системы оценки полученных результатов изложены в ряде предыдущих публикаций [Васнева Ж.П. с соавт., 1997, 1998].