В ОЛД СДЦ педиатрами направляются дети с отягощенным прививочным анамнезом в период вакцинации. Целью обследования, в основном, является выявление повышенной чувствительности на планируемые к введению вакцины. До 1996 года в лаборатории СДЦ для осуществления данной цели использовались реакция специфического лейколизиса с вакцинами и модифицированный тест Уанье.
С 1996 года в практику работы лаборатории был внедрен новый разработанный сотрудниками метод специфической диагностики in vitro по динамике уровня экспрессии общелейкоцитарного антигена CD45 — CD45 — тест.
Вкратце остановлюсь на результатах апробации нового метода:
— в 1997 году за этот метод автором был получен грант на 5 Восточно — Тихоокеанском Симпозиуме по Аллергии в Корее;
— в 1999 году на основе результатов, полученных с использованием данного метода при обследовании пациентов с лекарственной гиперчувствительностью автором была защищена кандидатская диссертация ;
— в 1999 году был запатентован в Федеральном институте промышленной собственности № 99123165 (от 4. 11. 99);
— по результатам использования данного метода было опубликовано 12 работ в центральной, региональной отечественной и зарубежной печати.
Из них:
— 10 — посвящены анализу результатов обследования пациентов с лекарственной гиперчувствительностью;
— 2 — посвящены анализу результатов обследования детей в процессе вакцинирования при использовании в тест — системе in vitro вакцин и туберкулина.
Итак, вкратце что из себя представляет общелейкоцитарный антиген CD45 и почему динамику его экспрессии мы выбрали в качестве показателя повышенной чувствительности на лекарственные препараты и вакцины?
Основанием для этого послужили литературные данные, показывающих, что в силу своих структурно — функциональных особенностей СD45 в тест — системе in vitro с антигенами может служить показателем степени сенсибилизации на конкретный антиген.
Каковы же эти особенности CD45?
Во — первых, локализация CD45:
CD45 — трансмембранный гликопротеин, пронизывающий насквозь цитоплазматическую мембрану всех ядросодержащих клеток крови;
Находясь в мембранах Т — лимфоцитов, CD45 ассоциирован с антигенраспознающим комплексом: на Тh — TCR-СD3 -СD4. на Ts — TCR — CD3- CD8;
Находясь в мембранах В — лимфоцитов, CD45 ассоциирован с CD22;
Находясь в мембранах лейкоцитов, CD45 в числе прочих ассоциирован с молекулами адгезии и высокоаффинными рецепторами для IgE.
Во — вторых, строение CD45:
Антиген состоит из трех частей:
внеклеточная — рецепторная — представлена 4 изоформами CD45RA, RO, RB, RC:
мембранная — является каналом для потока ионов кальция через мембрану;
внутриклеточная — каталитическая — представляет собой фермент тирозинфосфатазу, которая катализирует реакцию фосфорилирования тирозинкиназ р56 и р59, приводя тем самым антигенраспознающий комплекс лимфоцита в активированное состояние.
Исходя из его локализации и строения вытекают и стратегические задачи, которые CD45 выполняет в клетке:
обеспечивает процессы проведения антигенного сигнала на геном лимфоцита;
обеспечивает процесс выбора толерантности к данному антигену или запуска каскада иммунологических реакций по его элиминации.
На вышеперечисленных особенностях и базируется наш новый метод дифференциации нативных CD45+ — лимфоцитов периферической крови от сенсибилизированных с использованием МКАТ и лазерной проточной цитофлюориметрии.
В основном, этот тест предлагается и используется для определения специфической гиперчувствительности при обследовании пациентов с ЛГЧ (в тест — системе in vitro используются лекарственные препараты) и детей в процессе вакцинирования (в тест — системе in vitro используются вакцины). В этом случае динамика экспрессии CD45 представляется в виде коэффициентов сенсибилизации (КС). Нормативные значения КС к медикаментам различной групповой принадлежности установлены нами экспериментальным путем и приведены на бланках.