Внедрение таких современных биотехнологий, как гибридомная и проточная лазерная цитофлюриметрия в процесс лабораторного обследования пациентов с лекарственной аллергией позволяет разрабатывать диагностические методы in vitro нового поколения, с помощью которых предоставляется возможность получать дополнительную информацию об иммунологических особенностях формирования и развития аллергических реакций на более тонком уровне структурно — функциональной организации. Процесс создания новых методов базируется как на современных представлениях о патогенезе заболевания, молекулярно — иммунологических и иммуно — генетических закономерностях изучаемых явлений, так и на физико — химических и биомолекулярных принципах используемых технологий. В литературе последних лет в качестве новых методов специфической диагностики предлагается определение динамики различных функциональных характеристик сенсибилизированных лейкоцитов после воздействия причинных лекарственных препаратов разной групповой принадлежности in vitro [Leynadier F., et al., 1996, Pytski V.I., et al., 1997, Решетова Н.В. и др., 1997]. Однако, в публикациях, посвященных описанию вновь разработанных методов специфической диагностики лекарственной сенсибилизации, не приводятся результаты анализа критериев информативности предлагаемых методов ( диагностические информативность, чувствительность, специфичность и значимость).
По нашему мнению, основное внимание, при разработке новых методов специфической диагностики, следует акцентировать на изучении динамики антигенно — рецепторного комплекса мембраны лимфоцитов, где и формируются иммунологические особенности аллергической реактивности организма [Васнева Ж.П., Торопова Н.Е., 1997] вследствие нарушения процессов проведения антигенного сигнала и последующей атипической регуляции антителопродукции [Бережная Н.М. с соавт., 1983, Ялкут С.И., Котова С.А., 1987, Бережная Н.М., Котова С.А., 1990]. Особое внимание, с этой точки зрения, в последнее время привлекает общелейкоцитарный антиген CD45, экспрессирующийся на всех ядросодержащих клетках крови и имеющий в своем составе гликопротеин тирозиновой фосфатазы. По экспериментальным данным последних лет, CD45 осуществляет антигенспецифическую активацию CD4+-, CD8+- и CD22+ -лимфоцитов, является центральным звеном в передаче раннего антигенного сигнала на TCR -комплекс и, следовательно, самым непосредственным образом влияет на регуляцию процессов антителопродукции [Albin J.G. et al., 1994]. Кроме того, в ряде работ было экспериментально доказано, что антиген CD45 способен образовывать связь с Fcε RI моноцитов, базофилов [Gorvaia N. et al., 1995], вследствие чего не исключено его участие в развитие IgE — опосредованных аллергических реакций.
В связи с этим целью данной работы является характеристика критериев информативности разработанного нами теста на определение уровня экспрессии CD45 лимфоцитами , предлагаемого в качестве метода специфической диагностики, на основе сравнительной оценки состояния общего и специфического иммунитета у пациентов с непереносимостью антибиотиков в анамнезе и атопически здоровых доноров.
Для выполнения поставленных задач было обследовано 16 пациентов в возрасте от 15 до 50 лет с направительным диагнозом “лекарственная аллергия на антибиотики”. Определяли уровни экспрессии лимфоцитарных антигенов CD3, CD4, CD8, CD20, CD16, HLADR в периферической крови [Барышников], уровни иммуноглобулинов (Ig) А, М, G [Manchini G., et al., 1965], Е общего с использованием ИФТС (“Диаплюс”, Москва), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), фагоцитарную активность нейтрофилов (ФП), функциональную активность нейтрофилов (НСТ — тест) и уровни лизосомально — катионных белков (ЛКБ) [Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983], активность компонентов системы комплемента [Фримель Г., 1987]. Оценка коэффициента сенсибилизации (КС) к антибиотикам (пенициллин, гентамицин, линкомицин, ампициллин, канамицин и другие) проводилась путем определения динамики удельной интенсивности флюоресценции (УИФ) меченных ФИТЦ CD45+ — лимфоцитов после инкубации периферической крови с раствором лекарственного препарата с использованием разработанного нами теста на уровень экспрессии CD45 лимфоцитами [Васнева Ж.П., Торопова Н.Е., 1995, Vasneva J.P., et al. 1997].
В качестве контрольных были использованы результаты обследования 60 здоровых доноров cоответствующих возрастов и не имеющих клинических проявлений аллергических реакций на пищевые, бытовые, пыльцевые и лекарственные вещества в анамнезе.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью ЭВМ IBM 1A 486 по программному обеспечению Statgraph и Microsoft EXCEL.
Изучение особенностей распределения частот встречаемости отдельных значений КС (отражающих степень снижения УИФ меченных ФИТЦ CD45+ — лимфоцитов после инкубации с причинными лекарственными препаратами in vitro) показало, что значение КС равное 0.5 (принятое нами за критическое) является границей, за которой повышенные КС встречаются только у пациентов с лекарственной аллергией